Seahorse XF 实验常见问题及解答
1.计划明天做实验，我今天要做些啥？
以检测贴壁细胞为例：首先，实验前一天，打开主机（南方湿度大的地方建议提前3天开机），打开电脑，同时点开Wave软件，确保是Ready的状态；第二，水化探针板；第三，贴壁细胞提前接种到Seahorse的细胞培养板里。
2.探针板水化听说有二步，是这样吗？
是的，8孔探针板，实验前一天，用无菌水；第二天做实验前，弃去无菌水，更换上37℃预热好的校准液，再放置无CO2恒温箱（即普通37℃恒温培养箱）孵育1小时，这样二步法水化，最大程度避免了探针头上的小气泡；24机型探针板一步法水化即可，但是还是建议用之前手动排一下气泡。
3.背景校正孔怎么设置？
背景校正孔里除了没有细胞，其它所有操作和细胞孔一致。96机型背景校正孔（A1,A12, H1, H12，即4个角）不接种细胞；24机型背景校正孔设置为（A1, B4, C3, D6）；确保背景校正孔中只加入培养液（无细胞）。
4. 使用pH 7.4 的 XF DMEM 或 RPMI 基础培养基制备检测液时，加上Seahorse的三个底物，是否就无需调整pH了？
是的。使用推荐的 XF 三个底物，能确保分析培养基最终 pH 值的准确。如果使用其他供应商提供的其他品牌的补充剂，则无法保证培养基pH 值的准确。启封后的pH7.4的DMEM或RPMI基础培养基，尽可能在一个月内用完，以免pH值因为空气中的CO2进去，影响pH值。
5. Seahorse的培养基与其他厂家的有啥不同？
Seahorse XF 培养基专用于 XF 分析，推荐研究者使用，以获得最佳试验结果。XF 培养基以标准细胞培养基组分（DMEM 或 PRMI）为基础，做了以下这些方面改进：
无碳酸氢盐和低缓冲容量：利于细胞外酸化率的检测
无底物添加：适用于用户的各种不同需求
低浓度酚红或无酚红：确保 pH 值测量的准确性
6. 为什么要进行无 CO2 孵育？
1 小时孵育对于细胞板排气非常重要，能够让 CO2 从细胞、培养基和细胞板中扩散出来。
7. Seahorse XF报告生成器中的代谢数据是如何计算的？
在每个试剂盒的Seahorse XF报告生成器的用户指南中详细列出了数据的计算公式，请参阅。
8. Seahorse XF 实验后，是否需要做归一化处理呢，有哪些方法呢？
功能生物数据的归一化是原始数据展示和后续分析工作流程中的关键因素，以确保对结果的准确一致的解析。XF 代谢分析在这方面也是如此，大多数实验需要进行某种形式的归一化。无论是比较不同的细胞类型、基因修饰还是化合物处理，都必须根据共同的参数将数据归一化以便正确比较。
常用的方法，蛋白定量，细胞成像计数，核DNA的检测等。
9. Seahorse XF 相关试剂盒的说明书在哪呢，有中文的吗？
Agilent 一直提倡遵循环保理念，当您收到试剂盒后，标签面都有一个二维码，扫描即可下载说明书。部分有中文说明书，请联系相关技术支持索取。
10. 可以使用失效（超出保质期）的探针板或重复使用吗？
安捷伦无法保证因使用超出保质期的探针板或重复使用探针板而得到的实验数据质量（有效性），为得到最佳最真实的数据，请使用有效期内的探针板及其他消耗品。
11. 水化探针板需要多长时间？
安捷伦建议将探针板放入 37℃无 CO2 培养箱中水化过夜以得到最优结果。最短水化时间是 37℃水化 4 小时，但是为得到最佳数据不建议采用这么短的时间。探针板最长水化时间是 37℃水化 72 小时，但由于液体蒸发需要补充(或更换)水化液，因此 37℃无 CO2 培养箱务必放置水盘保证湿度。
12. Fluxpak 和探针板有什么区别？
探针板是 Fluxpak 的组成部分，一个 Fluxpak 包含探针板、水化板、水化液和细胞培养微孔板。以上各消耗品数量因所购 Fluxpak 类型而不同。探针板不能单独订购，必须订购Fluxpak 来购买。但细胞培养板可单独购买。
13. 一次实验可以只使用探针板的其中一部分吗？
为了将所有药物或化合物成功地注入细胞培养孔中，安捷伦建议水化整个探针板并因需要将相同字母标注的全部加药孔注入药物（请参考实验流程中关于加载药物的注意事项）。
14. 实验中为何必须设置空白/背景校正孔？
空白孔/背景校正孔被用来过滤掉实验的干扰因素，比如温度和 buffering capacity，这些干扰因素会影响氧含量和 pH 变化（非来源于代谢变化的影响）；背景校正孔还能被用来修正整板间温度波动，来诊断潜在温度问题，作为实验获得非期望数据时的原因筛查的切入点。
15. XFp/XFe96 细胞培养微孔板的每个细胞孔的最大体积及底面积是多少？
250 µL。XFp 细胞培养迷你板的孔底面积为 11.40 mm2，约为普通 96 孔细胞培养板底面积的40%。
16. XFe24细胞培养微孔板的每个细胞孔的最大体积及底面积是多少？
1000 µL。XF24 细胞培养板每孔的接种面积为 0.275 cm²，与普通 96 孔细胞培养板每孔接种面积相近。
17. 可以在 seahorse 检测液中加入血清吗？
不建议加入血清（如：FBS），因为其会影响检测液的缓冲能力，并可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果。另外，使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药孔中进行注射时，会出现注射失败的情况。
18. 加入底物的检测液在多长时间内可保持稳定？或可以提前配好检测液和药物吗？
安捷伦建议 Seahorse 检测液在实验当天现用现配。药物也要现配现用，溶解后的药物要一次性用完，剩余的也不能用于下次实验了。
19. 可以购买试剂盒中同名称的其他厂家的药物自配进行代谢检测吗？
建议使用 seahorse 配套试剂盒进行检测，安捷伦所有试剂盒均经过了能量代谢实验的质量校验及功能验证，可保证实验数据的质量，且分析非期望数据时更容易更便捷，节省时间。
20. 检测液的 pH 对 XF 实验非常重要吗？
是的，Seahorse XF 实验通过测定细胞代谢物（如：氧和质子）的变化来确定 OCR 和ECAR，而检测液 pH 会影响这些代谢的产生或消耗，因此保持检测液一致的 pH（37℃，pH=7.4）非常重要。
21. Seahorse 实验，种细胞和平时种细胞有区别吗？
安捷伦细胞培养板种细胞时候，枪头抵壁，与水平面呈45°角度加入，加完在超净台静置1小时，有助于促进细胞均匀分布并减少边缘效应。96孔细胞板种80ul；24机型的板子分二步，先每孔接种100 μL细胞悬液，培养细胞1-6小时，细胞贴壁后，再补充生长培养基，每孔加入150μL生长培养液,总体积为250 μL。加液时沿壁轻轻加入，避免吹起刚贴壁的细胞。
22. Seahorse 探针板上机前加药，需要注意什么？
加药时同样方法，枪头抵着加药孔壁大约与水平面呈45°度角，将液体一次性加入到加药孔中，注意板子始终保持在平面上，加完药的探针板不能晃动，以免加入的液体漏入水化板中。（24的机型，在加药前需要取下粉色的水化辅助板）
23. 何种 XF 仪器适用于我的研究？
访问我们的仪器选择指南，帮您确定适合您实验模式的仪器。
24. OCR 和 ECAR 指示的信息
通过观察两个主要细胞产能途径之间的相互作用，可揭示其代谢表型以及其在底物、压力或病理条件下如何反应。通过研究细胞体系在应对不断变化的能源需求方面的潜能，研究人员能够将细胞的生理特征与基因组和蛋白质组学数据联系在一起，从而获得有关肥胖、糖尿病、癌症、心血管疾病和神经退行性疾病、安全性/毒性研究的新见解。
25. XF 技术和细胞的参考资料
请访问我们的细胞参考数据库。
26. XF 技术的工作原理
Seahorse XF 技术将固态传感器、光电探测和专用耗材相结合，能够在几分钟内完成对细胞代谢的实时测量。XF 探针板的探针能够实时测定由我们特别设计的组织培养微孔板中的瞬态微室中的氧流量和质子流量。软件会将流量值转化为耗氧率和胞外酸化率。如需更多信息，请访问工作原理网页。
声明：仅供研究使用，不用于诊断性操作。
版权说明：版权归原作者及安捷伦细胞分析团队，本文内容部分来源于美国安捷伦科技公司官网（www.agilent.com），如有问题请联系小编，欢迎批评指正，衷心感谢！
了解更多信息，请联系路易企业西南区业务联系电话：028-86625230、028-86625235；Agilent 技术热线：800-820-3278 、400-820-3278（手机）。
下面网址是安捷伦生命科学研究细胞分析：实时活细胞分析, 安捷伦细胞分析 | 安捷伦 (agilent.com.cn)，访问可获取更多资源。
