安捷伦Seahorse XF技术和xCELLigence RTCA eSight联合评估免疫细胞适应性和效价

安捷伦 Seahorse XF 分析仪

利用实时、活细胞、动力学相关生物学检测加速治疗药物开发。开发高效的免疫细胞疗法依赖于对免疫细胞功能各个方面如活化、增殖、免疫调节、效价、持久性以及维持细胞毒性杀伤的适应性的综合利用。所有这些都必须在抑制性肿瘤微环境中实现。安捷伦提供了强大的新一代解决方案，能够克服这些挑战并在更短时间内获得关键答案。

细胞代谢是 T 细胞命运和功能的已知驱动因素，是治疗设计、优化和生产过程中推断免疫细胞功能（如持久性和耗竭）的关键质量属性之一。安捷伦 Seahorse XF 与安捷伦 Seahorse T 细胞代谢分析试剂盒相结合，可实时提供 T 细胞代谢的完整信息，包括提供动态的功能性代谢测量，可以更直接地实时测量正在发生的免疫细胞过程。为了充分理解和控制免疫细胞生物学的动态性质，需要进行实时活化分析以打开早期窗口并提供干预机会。代谢分析不仅提供了实时活化 动态，还提供一组丰富的通路靶标来调控免疫细胞生物学。

Seahorse XF 细胞能量分析系统

安捷伦 xCELLigence RTCA eSight

xCELLigence RTCA eSight 可提供简单的自动化工作流程，可置于 培养箱中全天不间断生成关键数据。通过实时活细胞分析，以及阻 抗检测（无标记）和成像（明场、红色、绿色和蓝色荧光通道）的 组合，您可以在数秒、数小时或数天内轻松监测和定量细胞动力学 数据。5 个板位，均兼容 96 孔板，支持多用户同时使用，确保高通量、高信息量且高效的工作流程。

安捷伦 xCELLigence RTCA eSight

最近使用 xCELLigence 系统发表的一篇研究，充分展示了将高灵敏度功能分析和时间分辨相结合的价值。这项研究开发了一种 CAR-T 细胞策略来解决癌细胞群中抗原表达的异质性问题。过继性细胞疗法 (adoptive cell therapy, ACT) 中一个常见现象是，表达了目标抗原的癌细胞被杀死，而未表达抗原的细胞将继续不受阻碍地增殖。为了尽可能减少这种现象，作者同时靶向两种肿瘤细胞抗原，并使用 xCELLigence 来评估其功能和持久性。下图所示的结果使作者能够选择更理想的基因工程构造子，依据在非常低的效靶比下，对多种共刺激结构域和一个恒定抗原结合域的组合的杀伤效果进行的高灵敏度定量分析（N. Ahmed，结果未发表）。 同时，他们还得以采用时间分辨分析识别潜在的逃逸表型。通过连续监测阻抗，很容易监测到在连续杀伤过程中出现的这些细微差别，但使用传统的终点分析方法时无法检测到这些变化。

在低效靶比 (1:10) 下，对多种专用共刺激结构域与一个恒定抗原结合域的组合的杀伤效果进行定量分析，同时根据时间分辨分析数据确定潜在的逃逸表型（粉色线和橙色线）（N. Ahmed，结果未发表，2019 年 4 月 2 日）

安捷伦 Seahorse XF 分析仪同样是一个能够提供丰富的功能数据的高灵敏度时间分辨分析平台。Carl June 团队发表的一项关键研究展示了不同的 CAR-T 基因工程构造子是如何通过驱动不同的代谢程序，对细胞命运和功能产生显著不同的影响。它揭示了如何优化基因工程构造子的肿瘤消除活性，以及提高其在微环境中的持续性和持久性。下图简要总结了他们的研究结果，揭示了含有共受体信号转导结构域 4-1BB 的 CAR-T 细胞是如何诱导与形成中枢记忆以及增强持久性相一致的有氧呼吸。相反，对 CD28 共受体信号转导结构域进行修改可将代谢重编程为有氧糖酵解，从而增强效应记忆细胞这一细胞命运。这项研究有力地证明了改造代谢特征的可行性，即建立效应细胞和记忆细胞的适当平衡，以解决在不良肿瘤微环境中免疫细胞的衰竭和持久性问题，从而为实现持久记忆和免疫监视奠定坚实基础。

选择不同的 T 细胞信号转导结构域将不同程度地影响代谢编程，从而为细胞疗法的微调提供了可能。含有 4-1BB 的CAR-T 细胞线粒体增加，需氧更多，从而增强了体外持久性和中枢记忆的细胞命运。相比之下，CD28 可加强糖酵解过程，从而增加效应记忆的细胞命运。图片摘自 Kawalekar et al., Immunity 44, 380–390 (2016)。

声明：仅供研究使用，不用于诊断性操作。

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