安捷伦 XF 底物氧化压力测试试剂盒常见问题解答
安捷伦Seahorse XF 底物氧化压力测试试剂盒是一套用于测定细胞内底物氧化的优化解决方案，通过评估活细胞中耗氧率(OCR) 的变化来测定细胞底物氧化。这套分析方法可以研究细胞如何氧化 3 种主要的线粒体底物：长链脂肪酸 (LCFA)、葡萄糖/丙酮酸和/或谷氨酰胺，有助于研究细胞如何通过改变或转变特定底物的氧化，从而执行激活、增殖和分化等关键细胞功能，并对遗传干预、药物干预或微环境生存做出响应。
安捷伦 Seahorse XF标准底物氧化分析和相关分析参数的动力学曲线
XF 底物氧化压力测试试剂盒常见问题解答
1. 需要优化细胞接种密度吗？
是。如需了解有关细胞密度优化基本流程的更多信息，请访问XF 分析学习中心和安捷伦细胞分析出版物数据库。注意，对于进阶棕榈酸氧化压力测试，如果对细胞进行底物限制，则可能需要降低细胞接种密度，因为这一步骤需要额外一天的细胞培养。
2. 需要优化 FCCP 浓度吗？
是。对于标准底物氧化压力测试，如果目标细胞类型之前进行过细胞线粒体压力测试，则 FCCP 浓度可能与线粒体压力测试所用的 FCCP 浓度相同。
3. 这些分析适用于悬浮细胞、原代细胞和/或免疫细胞吗？
是。但是，请确保目标细胞类型遵循适当的实验和分析程序。
4. 如果对抑制剂没有响应说明什么？
从生物学上讲，这表明在所确定的实验条件下，细胞对该底物没有需求或依赖。注意，在基础呼吸条件下（如底物需求较低的条件下），对这些抑制剂的响应通常较低或无响应。
5. 应该增加抑制剂的浓度吗？
不用。每种抑制剂都经过优化，以获得最佳的最终浓度：4 μmol/L Etomoxir，2 μmol/L UK5099 和 3 μmol/L BPTES。增加抑制剂的浓度，特别是Etomoxir，将导致脱靶效应，包括影响线粒体呼吸。
6. 长链脂肪酸氧化压力测试和棕榈酸氧化压力测试有什么区别？
长链脂肪酸氧化压力测试是3种标准底物氧化压力测试之一。其旨在测试在检测液中葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酰胺底物饱和的条件下，细胞对内源性LCFAs的需求，尤其适合回答与LCFAO有关的底物需求和依赖性问题。
进阶棕榈酸氧化压力测试是在检测液中棕榈酸（棕榈酸-BSA的形式）和左旋肉碱饱和，而葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酰胺底物供应有限的条件下进行。当实验设计要求细胞仅氧化长链脂肪酸 （如棕榈酸）以研究干预措施对长链脂肪酸氧化过程的特异性影响时，本测试尤其适用。
7. 何时使用标准实验流程？
标准底物氧化分析旨在回答以下类型的问题：（1）细胞对特定的底物有需求吗？(2) 细胞是高度依赖于特定的底物，还是其他底物也能满足细胞的需求？(3) 如果对细胞实施基因操作或药物暴露等干预措施，线粒体底物需求和/或依赖性将受到何种影响？
8. 标准LCFAs分析的LCFA来源是什么？
长链脂肪酸来源于细胞内源性脂质/LCFAs，因此与细胞类型有关。
9. 是否可以/应该在标准底物氧化压力测试分析中添加棕榈酸-BSA（FAs的来源）？
标准底物氧化压力测试中不建议添加棕榈酸-BSA，因为先前的研究表明，在充分补充的细胞培养基和随后在XF检测液中葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酰胺浓度饱和的条件下，细胞通常不会对外源棕榈酸作出响应。在相同条件下，添加棕榈酸的细胞对Etomoxir的响应并没有增强。如需研究细胞对棕榈酸的氧化，推荐采用进阶棕榈酸氧化压力测试分析。
10. 可以改变底物氧化压力测试检测液的成分（针对底物）吗？
建议从推荐的底物浓度开始，以研究饱和底物浓度下的细胞行为。补充的葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酰胺的最终浓度可能会改变，但在设计实验和随后的数据解析时应谨慎。
11. 可以同时加入两种（或更多）抑制剂吗？
建议从使用单一抑制剂来研究细胞行为开始。同一组细胞可以使用两种或两种以上的抑制剂，但在设计实验和随后的数据解析时应谨慎。
12. 何时使用进阶实验？
进阶实验旨在回答以下类型的问题：细胞的干预措施（如基因操作或药物暴露）如何特异性影响长链脂肪酸氧化？
13. 棕榈酸浓度是否饱和？
是。当使用建议的浓度时，棕榈酸的浓度已饱和。
声明：仅供研究使用，不用于诊断性操作。
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